PCR(聚合酶链式反应)是一项用于体外扩增特定DNA片段的重要技术,广泛应用于生物医学领域。其原理是模拟DNA的自然复制过程,通过DNA聚合酶快速扩增DNA。在PCR反应过程中,经过变性、退火和延伸三个步骤的循环,DNA的数量在每次循环后都会翻倍,从而在短时间内获得大量的目标DNA片段。
要建立一个成熟且稳定的PCR反应体系,需要满足以下条件:完整且纯净的DNA模板(可通过凝胶电泳和NanoDrop测定进行评估)、高特异性和高质量的引物(使用引物设计软件进行评分)、以及适宜的反应体系(如调节针对模板的GC含量,是否添加DMSO或甜菜碱等),还有合理的扩增反应程序(在引物Tm值附近多次实验以找到最佳退火温度)。反应程序的合理性与PCR仪的性能密切相关。
尊龙凯时的柏恒梯度PCR仪具备温度梯度功能,能够通过设置不同的温度梯度有效减少实验次数,加快退火温度的确定。常规梯度模式下,可以设定退火温度范围的低值和高值,通过孔位的温度渐进分布进行实验;而在线性梯度模式下,可在中间孔位设置固定温度,并定义相邻孔位的温差,确保温度的严格生成,便于验证感兴趣的整数温度。
线性梯度的优势在于可以同时进行多个不同退火温度的PCR反应,从而在一次实验中找出最优的反应条件,显著提高实验效率。二维梯度模式则允许在纵向和横向同时设置常规或线性梯度,形成不同温度下的变性及退火反应阵列,通过一次实验摸索出最佳温度组合。
二维梯度的多项优势包括:提升PCR反应特异性,优化扩增产物的纯度,检测已知突变位点的序列变化,以及解析种群间的遗传多样性,同时操作也相对简单。此外,利用此技术可以显著提高阳性检测的准确性,降低假阳性的发生,缩短实验时间,优化反应温度。这些特点使得二维梯度PCR成为生物医学研究领域的理想选择。
另有独立的6温区设置功能,相邻温区之间可设定不超过5℃的温差,实现多点退火温度的探索,每个温度区配备16孔以供复孔使用。这种设计相当于对线性梯度的升级,进一步提高了实验的灵活性和准确性。同时,尊龙凯时的PCR仪采用前进风后出风的散热模式,即使在并排或紧密摆放的情况下,也能确保控温的准确性,保障您的实验结果的可靠性。