miRNA与靶基因关系的研究方法

在miRNA研究领域，验证miRNA与基因之间的靶向关系是一个常见的主题。miRNA通过其种子序列（5'端第2-8个碱基）与mRNA的3'UTR区域结合，从而诱导细胞内沉默复合体介导的mRNA降解或抑制mRNA翻译。这一机制为miRNA与靶基因的相互作用提供了理论基础。

双荧光素酶报告基因检测的原理

基于上述原理，将目标基因的3'UTR区域（或结合位点下游500bp）插入到荧光素酶报告基因载体luciferase的下游，并与miRNA mimics一起共同转染到目标细胞中。随后，加入底物以检测荧光素酶活性的变化。如果荧光素酶活性显著下调，说明该miRNA与靶基因的3'UTR区域存在相互作用。

实验步骤

验证miRNA与靶基因3'UTR相互作用的实验工作原理主要包括以下几个步骤：

1. 使用生物信息学工具（如TargetScan、StarBase和miRanda等）分析特定靶基因的3'-UTR区域序列，确定是否存在miRNA结合位点。
2. 将预测的靶基因3'-UTR序列插入荧火虫荧光素酶的载体中。
3. 当miRNA与质粒中的插入序列结合后，会抑制荧光素酶的翻译，从而导致荧光值降低。

miRNA与靶基因相互作用的结构学验证

通过上述步骤，双荧光素酶报告基因检测可以有效验证miRNA与靶基因3'UTR的相互作用，为深入研究miRNA的功能和调控网络提供重要工具。

尊龙凯时的双荧光素酶报告基因检测服务流程

以下是详细的实验操作步骤：

1. 准备HEK293细胞或特定目标细胞，确认质粒瞬转效率，并选择合适的瞬转体系。
2. 将状态良好的细胞用0.25%胰酶消化并制备单细胞悬液，接种于24孔培养板。
3. 在细胞覆盖率约70%时，进行转染实验，按照转染试剂说明书添加转染试剂。
4. 转染48小时后，收集细胞样品，使用PBS洗涤，加入1×PLB进行细胞裂解。
5. 离心后取上清液进行荧光素酶活性检测，配置Renilla荧光素酶检测工作液，按照要求进行检测。

实验检测结果的预期

通过以上步骤，尊龙凯时能够提供高效的双荧光素酶报告基因检测服务，助力基础研究和药物筛选的进展。

相关产品清单

以下是推荐使用的产品：

• 双荧光素酶报告基因检测试剂盒：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit（货号：11402ES）
• 转染试剂：HieffTrans® Liposomal Transfection Reagent（货号：40802ES）
• 其他相关转染试剂及配套产品。