蛙病毒探针法荧光定量PCR试剂盒尊龙凯时说明书

尊龙凯时推出的CAT#: 15-45000蛙病毒探针法荧光定量PCR试剂盒，专为低温运输和保存而设计。建议在-20℃条件下保存，保质期为12个月。本手册详细介绍了此款试剂盒的使用方法及特点。

产品特点

蛙病毒（Ranavirus）具有广泛的细胞培养能力，并能抑制感染细胞中大分子的生物合成。它在细胞浆中的增殖方式与痘病毒相似，但其核酸合成同时依赖于宿主细胞的浆和核。蛙病毒可感染许多昆虫，并对幼虫有显著影响，因此快速、准确的鉴定蛙病毒在疾病预防和检疫中至关重要。针对这一需求，尊龙凯时开发了蛙病毒染料法荧光定量PCR检测试剂盒，具有以下优势：

1. 即开即用，只需提供样品DNA模板。
2. 优化的引物和探针，灵敏度高。
3. 提供阳性对照，方便识别假阴性样品。
4. 高特异性，专为蛙病毒高度保守区设计，避免与其他微生物DNA交叉反应。
5. 可用作定性和定量检测，定量检测线性范围覆盖至少5个数量级。
6. 产品容量足以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 仅限于科研使用。

成分及包装

该试剂盒包含以下成分：

• 2×Probe qPCR Magic Mix 500μL
• 荧光PCR专用模板稀释液 1ml
• 纯净水 1ml
• 蛙病毒探针法qPCR引物-探针混合液 150μL
• 蛙病毒探针法qPCR阳性对照 (1×10E7拷贝/μL) 50μL
• 使用手册 1份

使用方法

步骤一：稀释标准曲线样品

为确保标准品的稀释不会污染其他试剂盒成分，建议在独立区域进行以下稀释操作。此处以10E1-10E6拷贝/μL的6个稀释度为例。使用无传染性的DNA片段作为阳性对照：

1. 标记6个离心管，编号为6, 5, 4, 3, 2, 1。
2. 在每个管中加入45μL荧光PCR专用模板稀释液。
3. 在6号管中加入5μL阳性对照（1×10E7拷贝/μL），震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品，存冰备用。
4. 依次改变稀释倍数，直至获得6个标准曲线样品。

步骤二：样品DNA的制备

若需提取N个样品，最好设置N+2个提取，其中多出的两个为阳性对照（PC）和阴性对照（NC）。为了标准化实验，将阳性对照稀释1000倍后按需调配使其总体积与待提取样品一致。同时，使用水作为阴性对照。提取的DNA应兼容市场上大多数DNA提取试剂盒。

步骤三：Probe qPCR反应

在样品制备室进行20μL体系的PCR反应。如果进行定量分析，需标记N+9个PCR管，包括样品管、PCR阴性对照和标准曲线管。执行内容如下：

数据处理

在定量分析中，使用阳性对照浓度的log值作为横坐标，Ct值作为纵坐标，绘制标准曲线。从中推算样品核酸浓度的log值。在定性检测中，阴性对照的Ct值须大于等于40，阳性对照则应小于等于36。待测样品若Ct值在36-40之间，需重复实验，进行结果确认。

借助尊龙凯时的蛙病毒染料法荧光定量PCR试剂盒，您可以高效精准地对蛙病毒进行检测，为相关研究与临床提供有力支持。