胎牛血清（Fetal Bovine Serum，FBS）是以健康母牛怀孕4至8月龄的胎牛血液为原料，经过无菌采集和分离微孔过滤等多道工序制成。它在各类真核细胞的细胞培养中被广泛使用，提供了关键的营养成分以及细胞接触和伸展因子，因此它已经成为了实验室中不可或缺的常用材料。为了确保胎牛血清的有效性，并提升细胞培养的成功率，本文将分享一些实用的小贴士，帮助科研人员顺利进行细胞实验。
胎牛血清通常储存于-20℃，如需长期保存可置于-80℃。解冻时不建议直接将其置于常温（25-37℃），因这可能导致絮状沉淀，从而影响血清质量。推荐的方法是将其从-20/-80℃转移至4℃进行缓慢解冻，待完全化冻后再转至室温。解冻过程中应适时晃动，以促进成分和温度的均匀混合，减少沉淀的产生。解冻后，建议将血清分装于15mL或50mL无菌离心管中进行冷冻储存。同时，根据使用频率可保留一管解冻血清于4℃，但不宜超过一个月，以避免细胞生长因子的失活。
在细胞培养中，血清的添加量通常控制在5%、10%或20%。大多数细胞在正常培养过程中使用10%的FBS，而部分原代细胞在提取时可能需要20%的浓度。具体的血清适用浓度应根据细胞特性及实验目的进行调整。
热灭活是指在56℃处理已解冻血清30分钟，以去活化补体。补体参与的反应包括溶细胞活性、平滑肌收缩及淋巴细胞的激活等。对于常规细胞培养，热灭活并不是必须的步骤，过高的温度反而可能影响血清的质量，导致细胞生长速率下降甚至沉淀物增加。
细胞在培养过程中需要更换血清时，直接更换成新血清可能导致细胞生长缓慢甚至脱落。为避免这种问题，建议通过梯度替换的方式逐步适应新的培养环境。首次更换时，可按新旧血清1:3的比例进行替换，第二次换为1:1，第三次则按3:1，最后实现完全替换。对敏感细胞，需进一步细化替换比例。
如果解冻后的血清中出现少量乳白色的絮状物，通常是脂蛋白变性或纤维蛋白所致，此类悬浮物不会影响血清质量。可通过400×g离心5分钟，取上清后继续使用，对细胞影响甚微。
一般来说，厂家提供的胎牛血清为无菌状态，无需再行过滤。如若发现有悬浮物，则可将血清与培养液一同过滤，切勿直接过滤血清。
在细胞培养过程中，如果观察到“动”的小黑点，应先确认培养基是否混浊。若黑点不规则游动且培养基变色，则可能是微生物污染。若生长状态未出现明显变化，则黑点可能为细胞破碎后的残骸、血清中的杂蛋白或培养基不合格所致。可通过离心或过滤去除，若是原代细胞，则可能是组织杂质，可通过多次传代消除。
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